FLI1 gene influences lesion size and skin test may predict therapeutic response in cutaneous leishmaniasis

Genes associated with wound healing have been shown to be risk factors for cutaneous leishmaniasis (CL) which is caused by Leishmania braziliensis. In this study, we examined whether the genes previously associated with CL influenced the clinical outcome. Patients were genotyped and retrospectively classified as responders, who were cured with a single course of pentavalent antimony (Sbv), or as refractories, who did not respond to Sbv. Patients characterised as responders showed a stronger response to the leishmanin skin test (LST) when compared to the refractory subjects (p = 0.0003). Furthermore, we observed an association between the FLI1 CC genotype and an increased size of ulcers (p = 0.0170). We suggest that the leishmanin skin test may be a predictive tool for therapeutic outcome and reinforce FLI1 as a potential influencer of susceptibility and lesion size in CL.

Estudo da Variabilidade Genética de Leishmania (Viannia) braziliensis em Minas Gerais, Brasil

No Brasil, de todas as espécies do gênero Leishmania, a mais frequentemente encontrada parasitando o homem é a Leishmania (Viannia) braziliensis. Esta espécie pode causar um amplo espectro de manifestações, desde lesões únicas ao envolvimento mucoso, sendo esta última a complicação mais séria. Análises que visam acessar a variabilidade genética de Leishmania (Viannia) braziliensis são essenciais para o estudo de possíveis correlações entre manifestações clínicas de leishmaniose tegumentar americana (LTA) com parasitos geneticamente variantes e sua origem geográfica. O objetivo do estudo é analisar a variabilidade genética de isolados de L. braziliensis provenientes de diversas regiões de Minas Gerais. Foi realizado o diagnóstico clínico e molecular de indivíduos portadores de manifestações típicas e atípicas de várias regiões endêmicas do estado e os isolados separados em dois grupos amostrais: o grupo 1 contendo amostras de variadas macrorregiões do estado; e grupo 2 composto por amostras isoladas na terra indígena Xakriabá, em São João das Missões. A identificação específica de todas as amostras como L. braziliensis foi confirmada utilizando a técnica de PCR-g6pd. A análise da variabilidade genética foi realizada para os marcadores genéticos hsp70, Cpb, ITS1, g6pd e 6pgd. Na PCR-RFLP do hsp70 foram observados dois perfis de restrição: todas as amostras do grupo 1 e as cepas MG15 e MG16 do grupo 2 tiveram perfil de restrição indistinguível ao da cepa L. braziliensis referência, enquanto a maioria as amostras do grupo 2 exibiram perfil de restrição variante.

As cepas MG19 e MG27 (grupo 2) exibiram perfis de restrição diferentes das cepas referência utilizadas. O sequenciamento do fragmento da PCR-6pgd exibiu polimorfismos que diferenciam entre as espécies L. braziliensis e L. guyanensis nas amostras estudadas. Os perfis de restrição e as sequências foram utilizadas em análises estatísticas de classificação por similaridade por partição e hierárquico. A análise de partição corroborou a divisão das amostras em dois grupos, sugerindo uma maior variabilidade genética entre as amostras do grupo 2. As análises aglomerativas suportaram a de partição onde foi observada associação do grupo 2 com a origem geográfica e presença de manifestações atípicas de LTA não sendo observada associação com número de lesões. As sequências foram utilizadas em análises filogenéticas onde foi observado que tanto utilizando somente L. guyanensis quanto outras espécies filogeneticamente mais distantes de L. braziliensis como outgroup, a divisão em grupos proposta foi suportada. A partir do painel de amostras de L. braziliensis estudado conclui-se que em Minas Gerais observamos a presença de um grupo de amostras geneticamente variantes, associadas ao perfil atípico de lesões e provenientes da região norte do estado.

O fragmento obtido pela PCR do hsp70 foi sequenciado e foram observados polimorfismos inclusive no sítio de restrição da enzima HaeIII. Na PCR-RFLP do Cpb, as amostras do grupo 1 e as cepas MG15 e MG16 do grupo 2 tiveram perfil de restrição indistinguível ao da cepa referência, enquanto a maioria das amostras do grupo 2 apresentaram perfil de restrição correspondente à demais espécies do subgênero Viannia. O sequenciamento do fragmento revelou polimorfismos inclusive no sítio de restrição da enzima TaqI. Na PCR-RFLP do ITS1 foi observado que as amostras do grupo 1 e as cepas MG15 e MG16 exibiram perfil de restrição semelhante a L. guyanensis, enquanto as amostras do grupo 2 perfil de L. braziliensis.

Prospecção de LRV1 em Leishmania braziliensis do estado de Minas Gerais

Leishmania RNA vírus (LRVs) são comumente encontrados infectando espécies de Leishmania, especialmente as do subgênero Viannia. O LRV1 é um vírus RNA de cadeia dupla (Totiviridae) descrita pela primeira vez em cepas de Leishmania guyanensis e Leishmania braziliensis da região amazônica. Dados anteriores demonstraram que cepas infectados com LRV1 provoca um perfil próinflamatório mais Exacerbado parcialmente causada pela activação de receptoresToll like 3 (TLR3) através do cDNA viral. A presença de cepas infectadas pelo LRV1 já foi detectado em biópsia de pacientes com leishmaniose cutânea (LC) da cidade de Caratinga, Minas Gerais. No entanto, não há informações da frequência de LRV1 para outras regiões endêmicas do Estado. O principal objetivo deste estudo é a prospecção da presença de LRV1 em cepas de Leishmania braziliensis isoladas de regiões no estado de Minas Gerais incluindo São João das Missões, onde são relatados muitos casos de CL na reserva indígena de Xacriabá e também formas atípicas de leishmaniose cutânea causa das por L. braziliensis que nunca anteshaviam sido prospectadas para o LRV1. As reacções de PCR utilizaram iniciadores para a cápsideo viral e o cDNA de L. guyanensis (MHOM/BR /75/M4147) foi utilizado como controlo positivo. Foram prospectadas 41 cepas de L. braziliensis de várias regiões do Estado de Minas Gerais e alguns outros de outras regiões. A presença deLVR1 em parasitos isolados a partir de pacientes não foi observada. Esses resultados sugerem que a frequência de LRV1 em cepas de L. braziliensis parecem ser muito baixa na região Sudeste do Brasil.

Estudo da Variabilidade Genética de Leishmania (Viannia) braziliensis em Minas Gerais, Brasil / Study of Genetic Variability of Leishmania (V. ) braziliensis in Minas Gerais, Brazil

No Brasil, de todas as espécies do gênero Leishmania, a mais frequentemente encontrada parasitando o homem é a Leishmania (Viannia) braziliensis. Esta espécie pode causar um amplo espectro de manifestações, desde lesões únicas ao envolvimento mucoso, sendo esta última a complicação mais séria. Análises que visam acessar a variabilidade genética de Leishmania (Viannia) braziliensis são essenciais para o estudo de possíveis correlações entre manifestações clínicas de leishmaniose tegumentar americana (LTA) com parasitos geneticamente variantes e sua origem geográfica. O objetivo do estudo é analisar a variabilidade genética de isolados de L. braziliensis provenientes de diversas regiões de Minas Gerais. Foi realizado o diagnóstico clínico e molecular de indivíduos portadores de manifestações típicas e atípicas de várias regiões endêmicas do estado e os isolados separados em dois grupos amostrais: o grupo 1 contendo amostras de variadas macrorregiões do estado; e grupo 2 composto por amostras isoladas na terra indígena Xakriabá, em São João das Missões. A identificação específica de todas as amostras como L. braziliensis foi confirmada utilizando a técnica de PCR-g6pd. A análise da variabilidade genética foi realizada para os marcadores genéticos hsp70, Cpb, ITS1, g6pd e 6pgd. Na PCR-RFLP do hsp70 foram observados dois perfis de restrição: todas as amostras do grupo 1 e as cepas MG15 e MG16 do grupo 2 tiveram perfil de restrição indistinguível ao da cepa L. braziliensis referência, enquanto a maioria as amostras do grupo 2 exibiram perfil de restrição variante...

Host genetic factors in American cutaneous leishmaniasis: a critical appraisal of studies conducted in an endemic area of Brazil

American cutaneous leishmaniasis (ACL) is a vector-transmitted infectious disease with an estimated 1.5 million new cases per year. In Brazil, ACL represents a significant public health problem, with approximately 30,000 new reported cases annually, representing an incidence of 18.5 cases per 100,000 inhabitants. Corte de Pedra is in a region endemic for ACL in the state of Bahia (BA), northeastern Brazil, with 500-1,300 patients treated annually. Over the last decade, population and family-based candidate gene studies were conducted in Corte de Pedra, founded on previous knowledge from studies on mice and humans. Notwithstanding limitations related to sample size and power, these studies contribute important genetic biomarkers that identify novel pathways of disease pathogenesis and possible new therapeutic targets. The present paper is a narrative review about ACL immunogenetics in BA, highlighting in particular the interacting roles of the wound healing gene FLI1 with interleukin-6 and genes SMAD2 and SMAD3 of the transforming growth factor beta signalling pathway. This research highlights the need for well-powered genetic and functional studies on Leishmania braziliensis infection as essential to define and validate the role of host genes in determining resistance/susceptibility regarding this disease.

Leishmanioses do continente americano / Leishmaniasis in the Americas

No Brasil, ela já foi responsável por epidemias em diferentes cidades. Nos últimos dez anos, sua letalidade aumentou em diversas regiões do país. Em várias partes do mundo ela vem se expandindo, inclusive em lugares onde, anteriormente, não havia registro de transmissão. A infecção por parasitos do gênero Leishmania causa uma das doenças tropicais mais negligenciadas da atualidade. Estima-se que existam 350 milhões de pessoas em risco de contrair a infecção, sobretudo nas áreas mais pobres do planeta, e que dois milhões de novos casos de leishmanioses ocorram a cada ano. Esse grave cenário justifica o esforço empreendido pelos organizadores e demais pesquisadores do Instituto Oswaldo Cruz (IOC/Fiocruz) especialistas no assunto, assim como por profissionais de outras unidades da Fiocruz e instituições brasileiras: eles prepararam uma coletânea que compila o conhecimento já existente sobre o assunto, identifica os principais desafios e discute estratégias para enfrentá-los...

Expressão gênica associada à produção de IFNG na resposta inicial à Leishmania braziliensis / Gene expression associated to IFNG production at initial response to infection with Leishmania braziliensis

Células de voluntários saudáveis, expostas in vitro a Leishmania, podem produzir altos níveis de IFNG na primeira exposição ao parasita, caracterizando os indivíduos como alto respondedores (AR), ou baixos níveis de IFNG, caracterizando os indivíduos baixo respondedores (BR). O objetivo deste estudo foi estudar o perfil de expressão gênica associado ao padrão de produção de IFNG de indivíduos AR e BR. Também avaliamos se as assinaturas gênicas identificadas nos indivíduos AR e BR se associam com o padrão de resposta imune observado em indivíduos de área endêmica identificada como subclínicos (SC) ou portadores de Leishmaniose Cutânea Localizada (LC). Inicialmente, Células Mononucleares do Sangue Periférico (CMSP) de voluntários saudáveis foram estimuladas in vitro com Leishmania braziliensis e identificamos indivíduos AR (com produção de IFNG acima de 330 pg/ml)...

Naïve volunteers exposed to Leishmania in vitro can be high IFNG producers, characterizing a high-responder (HR), or low IFNG producers, characterizing a low-responder (LR). The purpose of this work is to characterize the gene expression profile associated to IFNG production in HR and LR individuals. Formerly, we analyzed if the gene signature identified could be associated with the pattern of immune response in individuals from endemic areas identified as subclinical (SC), or patients with Localized Cutaneous Leishmaniasis (LC). Initially, we stimulated Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMCs) from healthy volunteers in vitro with Leishmania braziliensis where we identified HR (IFNG production above 330 pg/ml)...

Genetic heterogeneity among Leishmania major isolates in Iran determined by restriction fragment length polymorphism [RFLP] and multilocus microsatellite typing [MLMT]

In recent years, molecular methods for characterizing genetic heterogeneity have found a major place in modern approaches. In this study, two different molecular techniques including Restriction Fragment Length Polymorphism [RFLP] and Multi Locus microsatellite typing [MLMT] were carried out in order to evaluate genetic heterogeneity among isolates of Leishmania major in Iran. In this experimental study, 24 Lmajor isolates from different endemic foci of cutaneous leishmaniasis were evaluated. All samples were amplified by specific primers for Internal Transcribed Spacer ribosomal RNA [ITS_rRNA] and miniexon genes [ME]. Ten different microsatellite markers were applied to 24 collected isolates as well. Restriction fragment length polymorphism of Polymerase chain reaction of ITS-rRNA and ME regions was identified in polyacrylamide gel electrophoresis. Size polymorphisms in PCR products of microsatellites markers were measured in the CEQ 8000 automated genetic analysis system. Population structure of the isolates was investigated by Structure Version 2.3.2 software. According to ITS- RFLP and ME-RFLP techniques, three and two different strains of Lmajor were determined, respectively, while microsattellites markers revealed 21 different genotypes, which were clustered in three genetic groups using structure software. Although genetic heterogeneity among studied L. major isolates was identified by molecular tools as used in this study, it seems that microsatellites markers are more useful in population structure and epidemiological studies. Our findings also showed correlation between different identified strains and their geographical regions

[Identification of Leishmania using microscopic and molecular methods in suspected patients of cutaneous leishmaniasis by targeting ITS-rDNA gene, Golestan province, Iran (2009-10)]

Zoonotic Cutaneous Leishmaniasis [ZCL] is a parasitic disease which caused by a protozoan belongs to the genus Leishmania. ZCL is of great public health importance in many countries and also in endemic parts of Iran. Leishmania major is the causative agent, Phlebotomus papatasi as the main vector and Rhombomys opimus is the most important reservoir of the disease. Species identification of Leishmania in a large scale of human samples is necessary to conduct a useful program for controlling the disease outspread. This study was done to identify the Leishmania using microscopic and molecular methods in suspected patients of Cutaneous Leishmaniasis by targeting ITS-rDNA gene, Golestan province, Iran. 121 smears collected from suspected patients of ZCL, in Eastern region of Golestan province, Iran during 2009-10, stained and examined under a light microscope. DNA of parasites extracted directly from smears and ITS-rDNA gene amplified. Positive samples digested with BsuRI restriction enzyme, according to RFLP method and subsequently the parasite was identified. After sequencing the ITS-rDNA gene, Molecular software was applied for verification of RFLP results. The achieved results were definitely approved by this procedure. 113 out of 121 and 92 out of 121 samples detected as Leishmania positive using microscopic examination and molecular method respectively. All 92 molecular positive samples digested with BsuRI endonuclease and 90 individuals identified as Leishmania major. In order to final verification, 8 samples of Leishmania major sequenced and confirmed by molecular software analysis. Unfortunately, sequences of two samples which were not Leishmania major were not readable, and consequently, these could not be identified. Comparison of obtained sequences of current study with Gene Bank sequences confirmed L.major in human from Northern Iran. Other species of Leishmania were not identified in this investigation but detection of two other samples, which were not L.major, could indicate the role of other Leishmania species causing infection in human in Eastern region of Golestan province, northern Iran. These findings should be considered to improve the disease control programs, which can be led to increase the rate of public health in Golestan province

Detecção de DNA de Leishmania braziliensis em pacientes de leishmaniose tegumentar americana / Detección de DNA de Leishmania braziliensis en pacientes de leishmaniose tegumentaria americana / Detection of Leishmania braziliensis DNA in American tegumentary leishmaniasis patients

Foi realizado diagnóstico para leishmaniose tegumentar americana a partir de sangue de pacientes residentes em dois municípios endêmicos do estado de Pernambuco. O DNA de 119 amostras de sangue foi extraído e submetido a reação em cadeia da polimerase. Utilizaram-se primers do minicírculo do DNA do cinetoplasto (kDNA) de Leishmania braziliensis, circulante em Pernambuco, cuja seqüência-alvo gera um fragmento de 750 pares de bases. No total 58 (48,7 por cento) indivíduos apresentaram amplificação positiva e 61 (51,3 por cento) negativa. Das amostras positivas para a PCR, 37 (≅ 64 por cento) pertenciam a indivíduos tratados e sem lesão. Conclui-se que a técnica de PCR é eficaz para identificar o DNA de leishmânia em material de biópsias e em sangue venoso.

Diagnostic tests for American tegumentary leishmaniasis were performed on blood samples of patients living in two endemic municipalities in the state of Pernambuco, Northeastern Brazil. DNA was extracted from 119 samples and used as template for polymerase chain reaction (PCR) analysis. The tests used primers specific for the kinetoplast mini-circle DNA (kDNA) of Leishmania braziliensis, a species circulating in Pernambuco, which amplify a 750 base pair target sequence. In total, 58 subjects (48.7 percent) showed positive PCR amplification and 61 (51.3 percent) were negative. Of the PCR-positive samples, 37 (≅64 percent) were from treated, lesion-free subjects. In conclusion, the PCR technique is efficacious at identifying Leishmania DNA in biopsy and venous blood samples.

Fue realizado diagnóstico para leishmaniosis tegumentaria americana a partir de sangre de pacientes residentes en dos municipios endémicos del estado de Pernambuco (Noreste de Brasil). El DNA de 119 muestras de sangre fue extraído y sometido a la reacción en cadena de la polimerasa. Se utilizaron primers del minicírculo del DNA del cinetoplasto (kDNA) de Leishmania braziliensis, circulante en Pernambuco, cuya secuencia blanco genera un fragmento de 750 pares de bases. En total 58 (48,7 por ciento) individuos presentaron amplificación positiva y 61 (51,3 por ciento) negativa. De las muestras positivas para la PCR, 37 (≅64 por ciento) pertenecían a individuos tratados y sin lesión. Se concluyó que la técnica de la PCR es eficaz para identificar el DNA de Leishmania en material de biopsias y en sangre venosa.

[Evaluation of mulecular epidemiology of cutaneous leishmaniasis in Sabzevar]

Cutaneous leishmaniasis is a parasitic infection With an important health problem in many parts of Iran such as Sabzevar, in Khorasan Razavi province. Epidemiological and clinical findings aren't sufficient for identification of parasites. Because the host sources are different an accurate identification and diagnosis is necessary before treatment. DNA of every parasite such as every organism is specific. This facilitates extensive use of DNA for diagnostic and identification of parasite species. Molecular methods such as PCR seem to be very useful for this reason. We decided to identify different species of leishmania parasites causing Cutaneous leishmaniasis by PCR in Sabzevar A Total of 86 patients, whom diseases were confirmed by direct smear, were recruited and samples were isolated and cultured in NNN medium, followed by sub-cultured in RPMI-1640. Then DNA was extracted using four DNA extraction methods. Extracted kinetoplastic DNA was amplified by PCR method using two specific primers. Electrophoresis patterns from each isolate were compared with reference strains of L.major, L.tropica and the markerThe related bands to amplified products were detected on agarose gel in all samples expected of DNA extracted by boiling method. The results of kDNA gene templets in Electrophoresis gel indicated the leishmania parasite species, causing Cutaneous leishmaniasis, in Sabzevar as 32 samples L.tropica and 54 samples L.major. L.tropica and L.major both are Etiologic agents ofCutaneous leishmaniasis in Sabzevar and PCR technique is a suitable tool for the leishmania species characterization in epidemiological studies. The phenol-chloroform based methods are as valuable as DNeasy mini kit [QIAGEN] but more cost effective than kit

A serological and molecular investigation of American cutaneous leishmaniasis in dogs, three years after an outbreak in the Northwest of Paraná State, Brazil / Investigação sorológica e molecular da leishmaniose tegumentar americana em cães, três anos após um surto, no Noroeste do Estado do Paraná, Brasil

Classic and molecular (polymerase chain reaction - PCR) techniques were used to diagnose American cutaneous leishmaniasis in 149 dogs from an area in the northwest of Paraná State, Brazil, where an American cutaneous leishmaniasis outbreak occurred in 2002. The results were compared to a set of previously obtained results. Twenty-five dogs had positive indirect immunofluorescence (IIF) (titers > 40), including two animals with suggestive lesions. The percentage of dogs with positive IIF was similar to that found in a previous study. The cultures of the lesion, blood and bone marrow were negative for Leishmania. A direct search for the parasite in the lesions proved negative, although PCR tests were positive. The PCR did not detect the DNA of Leishmania (Viannia) in the blood, even for those that had positive PCR in a previous study. The follow up of the 27 dogs showed that the majority of them had maintained the same levels of antibodies that had been detected previously. There was a reduction in the number of dogs with lesions, probably due to the transmission control measures that were adopted after the outbreak.

Neste estudo, utilizaram-se técnicas clássicas e moleculares (reação em cadeia da polimerase - PCR) para o diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana em 149 cães de uma área no noroeste do Estado do Paraná, Brasil, onde ocorreu um surto de leishmaniose tegumentar americana em 2002; os resultados foram comparados aos obtidos anteriormente. Vinte e cinco cães tiveram a imunofluorescência indireta (IFI) positiva (títulos > 40), incluindo dois animais com lesão sugestiva. O percentual de cães com IFI positiva foi semelhante aos encontrados nos inquéritos anteriores. As culturas dos materiais de lesão, sangue e medula óssea foram negativas para Leishmania. A pesquisa direta do parasito em lesão foi negativa, no entanto a PCR foi positiva. A PCR não detectou DNA de Leishmania (Viannia) no sangue dos cães estudados, mesmo naqueles que tiveram PCR positiva no estudo anterior. O acompanhamento de 27 animais mostrou que a maioria deles permaneceu com os mesmos níveis de anticorpos detectados anteriormente. Houve redução do número de cães com lesões, provavelmente em virtude das medidas de controle da transmissão adotadas após o surto de 2002.

DNA sequencing confirms the involvement of Leishmania (L.) amazonensis in american tegumentary leishmaniasis in the state of São Paulo, Brazil

INTRODUCTION: American tegumentary leishmaniasis (ATL) represents one of the most important public health issues in the world. An increased number of autochthonous cases of ATL in the Northeastern region of São Paulo State has been documented in the last few years, leading to a desire to determine the Leishmania species implicated. METHODS: PCR followed by DNA sequencing was carried out to identify a 120bp fragment from the universal kDNA minicircle of the genus Leishmania in 61 skin or mucosal biopsies from patients with ATL. RESULTS: DNA sequencing permitted the identification of a particular 15bp fragment (5' …GTC TTT GGG GCA AGT... 3') in all samples. Analysis by the neighbor-joining method showed the occurrence of two distinct groups related to the genus Viannia (V) and Leishmania (L), each with two subgroups. Autochthonous cases with identity to a special Leishmania sequence not referenced in Genbank predominated in subgroup V.1, suggesting the possible existence of a subtype or mutation of Leishmania Viannia in this region. In the subgroup L.2, which showed identity with a known sequence of L. (L.) amazonensis, there was a balanced distribution of autochthonous and non-autochthonous cases, including the mucosal and mucocutaneus forms in four patients. The last observation may direct us to new concepts, since the mucosal compromising has commonly been attributed to L. (V.) braziliensis, even though L. (L.) amazonensis is more frequent in the Amazonian region. CONCLUSIONS: These results confirm the pattern of distribution and possible mutations of these species, as well as the change in the clinical form presentation of ATL in the São Paulo State.

Clinical features of cutaneous leishmaniasis and direct PCR-based identification of parasite species in a new focus in southeast of Iran

To clinically characterize the cutaneous leishmaniasis and identify the causative parasite species in Mirjaveh, an important geographical region across the border of Iran-Pakistan at Southeast of Iran. A number of 116 patients during a year since March 2005 to April 2006, subjected to the study. Clinical information collected and scrapings were taken from cutaneous lesions and used for microscopic examination, NNN cultivation and kinetoplast DNA-PCR amplification. The cases comprised of 48 males and 68 females, 84 [72.4%] Iranians and 32 [27.6%] non-Iranians. They aged between 2 months to 68 years with the most affection of children, 0-10 years [55.2%]. The patients presented a total of 248 active lesions with an average of 2.14. The ulcers distributed mostly on upper extremity [42.3%] then on face [32.7%], followed by lower extremity [20.6%] and other parts [4.4%]. The majority of ulcers stated to be developed rapidly, <1 month [40.3%] or 1-2 months [45.2%]. However, from 248 ulcers, only 19 [7.7%] found to be wet and the remaining were dry or moderately wet, 45 [18.1%] and 184 [74.2%], respectively. kDNA-PCR assay detected 51 out of 73 samples, all of which were identified as L. major, the causative agent of zoonotic cutaneous leishmaniasis. L. major is the species responsible for cutaneous leishmaniasis in Mirjaveh, however the pattern of clinical findings, does not completely resemble the ZCL characteristics. These indicate that the manifestation of the lesions may not necessarily correspond to the Leishmania species and may be unreliable to conclude the speciation of parasite without laboratory identification

Leishmaniasis tegumentaria americana y fenotipos del TNFA y DQCAR en el sector Rincón Solo, Macapo - Edo. Cojedes: años 1993-2000 / American tegumentary leishmaniasis and phenotype of the TNFA and DQCAR in the quarter Rincon Solo, Macapo, State of Cojedes: years 1993 to 2000

Para evaluar las eventuales variables genéticas predisponentes a la leishmaniasis tegumentaria americana (LTA) que explicaran la agregación familiar, se seleccionó la población de Macapo - Estado Cojedes, donde la enfermedad es endemo-epidémica, y el sector Rincón Solo, que presenta el mayor número de casos (1993-2000), utilizando los polimorfismos en -238, -308, -376 de la región promotora de TNFA. No se observó asociación entre el fenotipo de la enfermedad y el alelo TNFA*A, en ninguno de los tres sitios polimórficos y aunque en -376 tampoco hubo asociación (X²=3,681; 0,05>p<0,06), siendo la FE (0,665) elevada, parece indicado seguir investigando esa situación. La frecuencia del supratipo GGA fue algo más frecuente en los testigos, comparada con la agrupación (casos + familiares sanos) pero no significativamente. La asociación del alelo 107 (DQCAR) entre los casos con LTA y testigos, fue muy significativa (X²=8,3382; p<0,005), confirmándose al analizar los casos genéticamente independientes; la asociación negativa del alelo 109 en los casos con LTA independientes, no fue significativa (p>0,07; RR= 0,298), aun con una FE de -2,356, lo que sugiere un efecto protector. No hubo asociación en los individuos sanos con intradermorreacción positiva (IDR+) considerados resistentes, y el alleo 109, quizás por el pequeño tamaño de la muestra. Recomendamos estudiar prospectivamente sujetos sanos con IDR(+) de un área endémica de LTA, mediante marcadores genéticos, con análisis de los polimorfismos del TNFA, para estimar la tasa de futuros afectados, e investigar los fenotipos del HLA-DQB1, y su influencia en la respuesta a la Leishmania.

Obtención y caracterización de clones de leshmania para la producción de antígeno / Production and characterization of leshmania clones for antigen production

Objetivos: Producción de leishmanina. Lugar. Intituto Boliviano de Biología de Altura, Facultad de Medicina, UMSA. Diseño. Experimental. Métodos. Una capa nativa (MHOM/BO/89EQ) y una cepa de referencia de OMS (MHOM/BR/75 2903) amsas correspondientes a Leishmania braziliensis braziliensis, fueron clonadas y cultivadas durante 7 días,la recolección de formas promastigotes se realizó en fase exponencial de crecimiento. Luego de fijación de parásitos el antigeno fué evaluado en un test de linfoproliferación con células de paciaentes con leishmania cutanea, In vivo, se realizó en hamsters y ratones, el tamaño de la lesión, desarrollo de metástasis, toxicidad anormal y diametro de induración. Resultados. El diámetro de induración obtenido en hambsters fué de 8 mm, 7.5 mm en ratones con la lesihmanina dae la cepa nativa EQ, con la cepa de refernecia 2903, en hamster fue de 7.6 mm y en ratones 8.25 mm. En pacientes con leishmaniasis se ha obtenido 75.67 por ciento y 76.19 por ciento de positividad en pacients conlesiones cutáneas y lesiones mucosas, respectivamente. La correlación cone l diagnóstico parsitológico es de 97 por ciento.